1、尺度品的请求

　　1、化学布局：原则上尺度品应与被测物存在完整不异的化学布局，包罗不异的立体化学布局。但在现实工作中，用化学布局完整不异的物资作尺度品是好不容易的。这是因为一方面来历有限，另外一方面有些被测物自己的化学布局还不清晰，或是有较着的异型性。所以有时也用布局近似的物资作尺度品。此时，应充实领会这些物资与真正尺度品之间的定量关系。

　　2、化学纯度：所有经由过程化学合成法制备的小份子化合物，都应是高化学纯度的纯品。对某些卵白类物资，则可能因为纯化的方式分歧而有差别。对此，在最初成立该方式时，应与国内上公认的尺度参考品或高纯度的纯品进行比对。

　　3、免疫纯度：标识表记标帜免疫阐发是经由过程比力被测物资与尺度品的免疫活性实现的，故被测物资与尺度品对所用抗体的免疫活性应当完整一致，即二者对所用的统一抗体有完整不异的亲和力。是以，尺度品的免疫纯度比其化学纯度更主要。

　　4、反映介质：免疫学反映受反映介质和温度等前提的影响，所以理论上请求尺度品和被测物应在完整不异的介质中进行反映。如测定血清中某物资的浓度，其所用的尺度品也应消融在无被测物的零值血清中；如测定尿液中某物资的浓度，其所用的尺度品也应消融在无被测物的尿液中等。但在现实工作中这一点很难做到。由于，血清中的成份非常庞杂，因此无被测物的零值血清的制备很是坚苦，并且个别血清中还可能存在一些烦扰物资。抱负的尺度品应当用与被测样品不异的基质(如血清)，先将被测物资完整去除，而后再插手已知量的被测物资的纯品。

　　5、烦扰物资：尺度品中不克不及有烦扰阐发的物资。在作为尺度品利用前，必需对那些从机体提取到的大份子物资活性进行测定。

　　6、尺度品的批量：为包管检测的持续可比性，每批尺度品应有相当大的量，以包管在较长的时候内利用。每批尺度品如保留的前提恰当，在相当长的时候内可连结其浓度和免疫活性的不变。这对于出产标识表记标帜免疫阐发试剂的厂家尤其主要。

　　2、尺度品的分级

　　所谓尺度品在英语中有三个名词，即尺度品(standard)、校准品(calibrator)、和参考品(reference)。这三个名词的意义不完整不异，但在国内它们则常常被混合。今朝在我国的标识表记标帜免疫阐发实践中，所谓的"尺度品"现实上是指校准品。为利用便利先仍用"尺度品一词"。

　　有关尺度品可分为以下的品级：

　　【国内参考品(international reference)】：国内参考品是由WHO指定的尝试室制备，并与有关国度的必然机构接洽(在我国事卫生部药品与生物成品检定所)，被国内公以为第一流此外尺度品。到今朝为止，与标识表记标帜免疫阐发有关的已达数十种。但因为标识表记标帜免疫阐发方式的敏捷成长，良多标识表记标帜免疫阐发方式还没有国内参考品。

　　【国度级尺度品】：国度级尺度品是由国度的有关权势巨子机构，用高化学纯和高免疫纯、低穿插反映的纯品制备的，供国度内部利用。国度级尺度品应与国内参考品或其他国度的国度级尺度品进行比对。我国现已有国度级尺度品数种，如胰岛素(insulin)、绒毛膜促性腺素(hCG)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、肝胆酸(CG)、甲胎卵白(AFP)等。

　　【尝试室尺度】：尝试室尺度是由尝试室本身，或由出产厂家制备的尺度品，又称二级尺度品。所有的二级尺度品都必需颠末与国度尺度品或国内参考品进行比对或校订。如没有国内参考品或国度级尺度品的，也应与国内公认的出产厂家的尺度品进行比对。

　　3、尺度品的制备、判定、与计量

　　1、尺度品的制备：尺度品的制备长短常庞杂的题目，也是标识表记标帜免疫阐发中比力难于制备的一个成份。以下会商的是尝试室尺度品(或商品化试剂中尺度品)的制备。

　　（1）基质的制备：如前所述，作为尺度品的介质(基质)成份应与被测样品不异。对大大都用于测定血清中某物资的尺度品，利用不含被测物资的零血清制备，以求反映的介质情况相当。但有时零值血清的制备好不容易，所以有些尺度品用恰当的缓冲液制备，并在缓冲液中插手必然量的载体卵白(个别用1%～2%的牛血清白卵白)，以便使其与样品的介质情况附近。

　　零值血清的制备方式有：

　　A、吸附法：血清中小份子物资如三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)等，可用活性炭吸附去除。这类方式简洁，但待测物资难以断根清洁，并且大份子活性物资不克不及用此法进行制备。

　　B、频频冻融法：对大份子活性物资可选用低值血清，经频频冻融使被测物资失活。用这类方式可以使某些卵白类激素大部门失活，但也难以获得真实的零值血清。

　　C、亲和层析法：用特异性抗体系体例备亲和层析柱，用以吸附被测抗原。用这类方式可以获得高质量的零值血清，但本法比力庞杂并且本钱也高。

　　（2）尺度物纯品的选择：应选择高化学纯和高免疫纯的纯品作尺度品。此中免疫纯尤其主要，在尺度品中不该含有与被测物资有穿插反映的物资。

　　（3）尺度品的制备：先用零值血清设置装备摆设高浓度的尺度品，而后按照尝试体系的请求，用零值血清将高值血清稀释至应有的浓度，制成合适预定请求的，由分歧浓度构成的系列尺度品。

　　2、尺度品的判定

　　（1）免疫活性的判定：选用高特异性的抗血清别离作公认尺度品(如WHO的国内参考品或国度尺度品)的待判定尺度品的剂量反映曲线，并察看两条曲线的平行性。如两条剂量反映曲线平行，申明两种物资对统一抗体有不异的亲和力，即两者是同质性物资。如两条剂量反映曲线不服行，申明两种物资存在异质性，因此这一待判定的尺度品是不克不及利用的。

　　（2）浓度的标定：用已判定过的，免疫活性及格的尺度品，与公认的尺度品作浓度不异的剂量反映曲线。此时，两条剂量反映曲线应当是根基重合的。若是二者平行但不重合，则取两条剂量反映曲线的50%连系处的响应剂量( ED50 )计较两者的换算系数，而后调剂待判定尺度品的浓度，直至使两条剂量反映曲线完整或根基重合为止。

　　3、尺度品的计量：很多小份子抗原或半抗原已能获得纯品或进行合成，它们对作为尺度品的请求可以获得根基的知足，其计量多直接用单元体积中的分量暗示，如mg / ml、ng / ml 、pg / ml等。比来WHO保举用质量单元代替分量单元，即mol / L、mmol / L、或nmol / L等。对大份子的活性物资则比力庞杂。因为得不到绝对的纯品，故很难直接用单元体积中的分量或单元体积中的质量计量。是以，经常使用该物资的生物活性单元暗示，如IU / L、mIU / L等。

　　4、尺度品的不变性与保留

　　如前所述，为包管检测的持续可比性，每批尺度品应有相当大的量，以包管能在较长时候内利用。是以，每批尺度品应在恰当的前提下保留，使其免疫活性和浓度连结不变。

　　1、影响尺度品不变的身分

　　（1）基质中的酶、细菌传染、pH的转变、氧化、湿润等身分都可以致使尺度品的变性，并且这些转变可因低温和光照加快。

　　（2）在保留进程中产生聚合反映等份子布局的转变，可以使尺度品失活。

　　（3）容器内壁的吸附感化和溶剂的蒸发可造成尺度品浓度的转变。

　　（4）保留前提不恰当也能够影响尺度品的不变性，如频频的冻融可下降尺度品的免疫活性等。

　　2、尺度品的保留方式

　　（1）冷冻干燥法：冷冻干燥对尺度品的浓度和免疫活性无较着的影响，是今朝最经常使用的保留方式。冷冻干燥成品在低温下，可在较长的时候内连结不变。但利用冷冻干燥成品时，复溶体积的精确度非常主要。是以，要用颠末校准的量器精确的复溶，以削减尺度品的浓度误差。

　　（2）在尺度品中加必然量的防腐剂可削减细菌传染的影响。

　　（3）密闭真空保留或充入惰性气体等方式也能够增添尺度品的不变性。 今朝最经常使用的方式是：在尺度品中插手少许的防腐剂(如0.1%叠氮钠或0.1%硫柳汞)，冷冻干燥后密封，并在低温下保留。但应注重，一旦复溶后应放低温保留，其实不得频频冻溶。复溶后的尺度品其有用期较着缩短，个别不跨越6～8周，有些物资可能更短。

　　编纂：songjiajie2010